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XH008 动物组织/细胞线粒体DNA提取试

北京百奥莱博科技有限公司
会员指数: 企业认证:

价格: 502.00¥

所在地:北京

型号:XH008

手机:18518407031(微信同步)

电话:010-56109559

更新时间:2019-05-04

浏览次数:414

公司地址:北京市海淀区北玉河村500号

18518407031(微信同步)   王欣(女士)   (来电时请说是从仪器交易网看到我的)

产品简介

动物组织/细胞线粒体DNA提取试由专业试剂供应商北京百奥莱博提供,用于生化实验研究等领域,动物组织/细胞线粒体DNA提取试是我司众多优质DNA提取纯化之一,质量堪比同类进口产品,价格非常优惠,目前正热烈促销中,恭候您的咨询订购。

公司简介

北京百奥莱博科技有限公司是一家专业的生物试剂销售公司。公司主要经营血清、抗原、抗体等生物试剂产品,可以为您提供专业的技术服务,以优良的价格、优质的服务、优先的理念,满足客户的各方面的需求,与国内多家企业、单位建立了良好的长期合作关系,拥有较好的企业信誉和品牌形象。
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产品说明

特别提示:包括动物组织/细胞线粒体DNA提取试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!


产品名称:动物组织/细胞线粒体DNA提取试剂盒
英文名称:Animal tissue/cell Mitochondrial DNA Extraction Kit
产品货号:XH008
产品规格:50T|100T

本试剂盒用于从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的线粒体。适合于动物软组织(肝或脑组织)和硬组织(肌肉)以及培养细胞线粒体DNA的提取制备。不适合植物及其他标本的提取。

线粒体DNA提取的关键是尽可能的去掉核DNA。本试剂盒利用差速离心到比较纯净的线粒体,再利用DNA酶消化裂解缓冲系统等多步骤去掉核DNA,zuì后得到纯净的线粒体DNA。可用于PCR等对纯度要求较高的实验。

试剂盒组成:
组份 50T 100T
细胞裂解液 50mL 100 mL
线粒体清洗液 25 mL 50mL
DNA酶I 12mg 22mg
DNA酶反应液 6ml 12ml
线粒体裂解液 10ml 20ml
蛋白沉淀液 7.5ml 15ml
核酸助沉剂 0.5ml 1ml
TE缓冲液 15ml 30ml

保存条件:2~8℃可保存一年。使用前,在DNA酶I中加入600μl(50T)或者1100μl(100T)的DNA酶反应液,分装后-20度保存。线粒体裂解液使用前常温保存,如有沉淀可37度水浴溶解,不影响使用。

操作步骤:
准备工作:在DNA酶I中加入600μl(50T)或者1100μl(100T)的DNA酶反应液,适当分装后-20度保存。线粒体裂解液保存于常温,如有沉淀37℃水浴溶解,离心机温度下降到4℃(2~8℃),如无低温离心机,也可以常温离心,并将离心时间为10min的改为5min,但zuì后所得DNA品质及产量可能会有一定影响。

1.样本处理
a.组织匀浆:称取100~200mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等,PBS或生理盐水冲洗,洗净血水,滤纸吸干,用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer,0℃冰浴上下研磨组织20次;
b.培养细胞匀浆:消化细胞,PBS洗涤,800×g 5~10min离心收集细胞。计数。每次提取需要5×107个细胞,加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬细胞,将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内,0℃冰浴研磨30~40次;
2.将组织或细胞匀浆物转移到离心管,4℃,1000×g离心5min;
3.取上清,加入一新的离心管中,4℃,1000×g再次离心5min。
4.取上清,加入一新的离心管中,4℃,12,000×g离心10min。离心后的上清含胞浆成分,可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管,线粒体沉淀在管底;
5.在线粒体沉淀中加入0.5 mL Wash Buffer重悬线粒体沉淀,4℃,1000×g离心5min;
6.取上清,加入一新的离心管中,4℃,12,000×g离心10min。弃上清,高纯度的线粒体沉淀在管底;
7.加入100μl DNA酶反应液重悬线粒体,吹打均匀后,再加入10μl DNA酶I溶液(见准备工作),混匀,37度水浴10min。此步为消化线粒体表面吸付的核DNA。4℃,12,000×g离心5min。尽可能的弃上清,再加入200μl TE重悬线粒体沉淀,离心,洗去残留的DNA酶。
8.得到的沉淀,用100μl TE重悬线粒体沉淀。加入200μl线粒体裂解液,轻轻混匀(不可吹打),放置2min左右,不超过5min,再加入150μl蛋白沉淀液,迅速混匀。4℃,12,000×g离心5min。此步骤可进一步去除核DNA。
9.取上清,加入一新的离心管中(可选用等体积的酚lǜ仿异戊醇25:24:1抽提一次,再用lǜ仿抽提一次,或者直接用lǜ仿抽提两次,一般来说,此步可省,并不影响后续的PCR),加入0.6倍体积的异丙醇(如无异丙醇,可加入2.5倍体积的乙醇沉淀DNA)及10μl核酸核酸助沉剂,混匀,-20℃沉淀半小时左右(此步可省),4℃,12,000×g离心10min。
10.弃上清,再加入1ml 70%乙醇,4℃,12,000×g离心10min。重复用70%乙醇洗一次。
11.弃上清后再次离心1min吸弃上清,开盖凉干约5-10分钟。
12.加入20-30μl TE缓冲液,轻弹管底,37度水浴5分钟,线粒体DNA溶解。
13.进行DNA电泳检测及-20度保存,进行下步的实验。

注意事项:
1.为保证获得完整及尽可能多的线粒体,匀浆条件要示:第一是全程低温操作。第二是快速。第三,如用条件可将匀浆后的碎片在显微镜下观察。与组织块相比,培养细胞特别是贴壁培养细胞在用玻璃匀浆器匀浆时较难破壁,因而要选用小容量玻璃匀浆器、间隙严密的研杵上下研磨培养细胞。
2.线粒体DNA本身含量很低,如果电泳检测不到,可加大上样量,用更少量的TE溶解沉淀,或者直接进入PCR检测。
3.以离心力g计算正确的离心速度,不同的离心机可据此精确计算离心速度。

一般低温度心机都有离心力显示,如果没有,可以用以下公式简单的换算。
  G=1.11×(10-5)×R×[rpm]2
G为离心力,一般以g(重力加速度)的倍数来表示;[rpm]2即:转速的平方;R为半径,单位为厘米。

根据您的关注的动物组织/细胞线粒体DNA提取试剂盒,动物组织/细胞线粒体DNA提取试剂盒,XH008,百奥莱博,,,您可能还对以下产品有需求:

货号 名称 规格
BTN90315 非冻型尿液DNA保存液 100mL
BTN60910 非冻型血液DNA保存液 250mL
BTN60403 红细胞裂解液A型(核酸纯化) 250mL
BTN80801 柱式拭子DNA提取试剂盒 50次
BTN51203 非酶RNA清除剂1.0 1.5mL
BTN60607 液相内毒素清除剂 100次
WE0185 血块基因组DNA提取试剂盒 50次


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名称:红细胞裂解液A型(核酸纯化)
货号:BTN60403
规格:250mL
本品用于快速裂解哺乳动物全血中的红细胞而基本不破坏白细胞和其他淋巴细胞的完整性。由于红细胞是血液的主要细胞成份,不含DNA和RNA,其所含血红素能抑制PCR反应,所以先用本产品裂解红细胞,再提取基因组DNA或RNA 有助于提高所得样品纯度。

产品特点:
1.快速,一次处理只需要2-3分钟。处理后提取血液DNA可以不需要酚/lǜ仿去蛋白质。
2.高效,一次处理能裂解80%以上的哺乳动物红细胞,一般样品zuì多只需要处理两次。
3.扩容性好,可以一次处理多达几十毫升的样品,也可以处理100μL的血液。
4. 兼容性好,可以与市场上大多数血液DNA提取试剂盒结合使用。

储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。

使用方法:
1.在装有抗凝血液的离心管中,按1:1的比例加入红细胞裂解液A型并轻柔颠倒混匀。
2. 5000-10000 g室温离心2分钟,小心吸弃弃上清。
3. 将细胞沉淀重悬于1/2 体积的红细胞裂解液A型中,轻柔吹打混匀后5000-10000g室温离心2分钟。
4.沉淀即为去除了红细胞的血液细胞,可以直接用于后续的实验。

名称:一步离心式石蜡清除剂
货号:BTN70302
规格:100次
用石蜡包埋组织作为材料进行PCR的难题之一是如何有效去除石蜡,因为残留的石蜡不但会影响DNA提取,还会干扰PCR扩增。常规的脱蜡方法一般需要1-2小时的时间,需要多次离心,每次离心都会造成样品的丢失。本产品只需要一步离心,克服了常规方法的缺点。

产品特点:
1.快速简单,只需要离心一次,免去了反复换液和离心,减少了样品的丢失。
2. 脱蜡效果好,跟经典的二甲苯/乙醇法相当。
3. 即开即用,客户自己不需要准备额外的试剂。

产品组成:
成分 规格
溶液A 100mL
溶液B 7.5ml
说明书 1份


储存条件:常温运输及保存,有效期一年。

使用方法:
1. 将1mL溶液A加入到1.5mL塑料离心管中。
2. 放入一片不超过25μm的石蜡包埋组织切片。
3.以zuì大速度振荡10秒。
4. 加入75μL溶液B。
5. 振荡10秒混合。
6. 7000 g离心2分钟,小心吸弃上清。
7.真空抽干机抽干离心管中残留的液体。此步骤约需要一小时。
8. 得到的石蜡包埋组织切片即可用于DNA提取。

本页产品地址:http://www.sp-il.com/sell/show-8531128.html
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